激酶試劑盒是一種基于激酶酶的特性設(shè)計的檢測試劑盒，用于測量激酶反應(yīng)中所形成的特定產(chǎn)物（如ADP或磷酸化產(chǎn)物）的量，從而間接反映激酶的活性。激酶酶能夠?qū)TP（三磷酸腺苷）上的磷酸基團轉(zhuǎn)移到特定的底物上，生成相應(yīng)的磷酸化產(chǎn)物，同時釋放出ADP（二磷酸腺苷）或AMP（一磷酸腺苷）。通過測定這些產(chǎn)物的生成量，可以評估激酶的活性。
激酶試劑盒的使用需嚴格遵循操作規(guī)范，以下從樣本處理、試劑準備、實驗操作、結(jié)果分析、安全防護五個維度梳理關(guān)鍵注意事項：
一、樣本處理：確保數(shù)據(jù)可靠性的基礎(chǔ)
采集與保存
血清/血漿樣本：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，避免溶血（溶血會影響結(jié)果，如IKKα/β試劑盒明確要求禁用溶血標本）。
組織樣本：需冰浴勻漿后離心取上清，避免蛋白質(zhì)變性（如NADK試劑盒要求組織勻漿后4℃離心）。
細胞樣本：超聲波破碎時需冰浴操作，防止溫度升高導致酶失活（如NADK試劑盒建議300W超聲3s，間隔7s，重復30次）。
保存條件：短期使用可2-8℃保存，長期需分裝后-70℃冷凍，避免反復凍融（如乙酸激酶AK試劑盒要求-20℃以下保存不超過6個月）。
預(yù)處理與稀釋
若樣本OD值超過標準品最高濃度，需用樣本稀釋液稀釋后重測（如IKKα/β試劑盒建議稀釋5倍后復測）。
渾濁樣本需離心后取上清，避免顆粒干擾（如NADK試劑盒對液體樣本的渾濁處理要求）。
二、試劑準備：細節(jié)決定實驗成敗
復溶與保存
粉劑試劑需離心后加蒸餾水溶解（如NADK試劑盒要求試劑一/二/四臨用前加雙蒸水溶解）。
部分試劑需-20℃冷凍保存，禁止反復凍融（如NADK試劑盒的試劑八需分裝后-20℃保存）。
濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，需37℃水浴助溶后稀釋（如乙酸激酶AK試劑盒的20×洗滌緩沖液需1:20稀釋）。
試劑平衡與避光
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出后，需室溫平衡15-30分鐘（如pERK試劑盒要求室溫平衡后使用）。
底物顯色液需避光保存（如IKKα/β試劑盒強調(diào)底物變藍后不可使用）。
三、實驗操作：標準化流程是關(guān)鍵
加樣與溫育
使用高精度加樣器，避免交叉污染（如肌酸激酶CK試劑盒要求微量移液器吸嘴不可混用）。
溫育時需用封板膜密封，防止液體蒸發(fā)（如IKKα/β試劑盒要求37℃溫育60分鐘）。
顯色步驟需嚴格控制時間（如乙酸激酶AK試劑盒要求37℃避光顯色10分鐘）。
洗滌與終止
洗滌需徹d，每次甩干孔內(nèi)液體并拍干（如IKKα/β試劑盒要求重復洗板5次）。
加入終止液后需立即測定OD值（如乙酸激酶AK試劑盒要求15分鐘內(nèi)完成測定）。
四、結(jié)果分析：科學解讀數(shù)據(jù)
標準曲線繪制
以標準品濃度為縱坐標，OD值為橫坐標，用相關(guān)軟件擬合直線回歸方程（如IKKα/β試劑盒要求R²≥0.990）。
樣本濃度需代入方程計算，若稀釋則需乘以總稀釋倍數(shù)（如乙酸激酶AK試劑盒要求乘以n×5）。
異常值處理
若樣本OD值接近零或超過標準曲線范圍，需調(diào)整樣本量或反應(yīng)時間（如NADK試劑盒建議減少樣本量或縮短反應(yīng)時間）。
五、安全防護：實驗室安全的底線
個人防護
操作時需戴一次性手套，處理試劑和樣本后徹d洗手（如肌酸激酶CK試劑盒要求所有樣本視為潛在傳染性物質(zhì)）。
廢棄物需按傳染物處理（如乙酸激酶AK試劑盒要求所有廢棄物按當?shù)胤ㄒ?guī)處置）。
試劑兼容性
避免使用含NaN3的樣本（如乙酸激酶AK試劑盒明確NaN3會抑制HRP活性）。
不同批號試劑不得混用（如所有試劑盒均強調(diào)批號一致性）。
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更新時間：2025-08-26 
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